1. Přesnost a opakovatelnost pipetování
Pro zjištění chyby, kterou do metody stanovení askorbové kyseliny kineticko-spektrofotometrickou metodou zaneslo pipetování, bylo provedeno stanovení přesnosti a opakovatelnosti pipetování. Byla pipetována destilovaná voda při laboratorní teplotě. Výsledky stanovení jsou uvedeny v tabulce č. 2.
Tabulka č. 2
Přesnost a opakovatelnost pipetování
|
|
Pipeta 2
ml |
Mikropipeta 0,2 ml |
|
Číslo pipetování |
Hmotnost [g] |
Hmotnost [g] |
|
1 |
1,6069 |
0,2020 |
|
2 |
1,6440 |
0,2016 |
|
3 |
1,5811 |
0,2030 |
|
4 |
1,6218 |
0,2019 |
|
5 |
1,6024 |
0,2014 |
|
6 |
1,6005 |
0,2026 |
|
7 |
1,5987 |
0,2020 |
|
8 |
1,6046 |
0,2013 |
|
9 |
1,6060 |
0,2007 |
|
10 |
1,6230 |
0,2025 |
|
Æ |
1,6089 |
0,2019 |
|
sr [%] |
1,06 |
0,34 |
U automatické mikropipety byla nalezena opakovatelnost (udávaná relativní směrodatnou odchylkou sr) sr = 0,34 %. Vyšší hodnota relativní směrodatné odchylky sr = 1,06 % byla nalezena u pipety o objemu 2 ml.
Dosažené výsledky ukazují na velmi přijatelnou přesnost a opakovatelnost pipetování.
2. Závislost indukční periody na teplotě
Měření bylo prováděno pro 3 oblasti teplot (přibližně pro 12 oC, 22 oC a 30 oC). Z důvodů nevybavenosti laboratoře temperovacím nástavcem byla nižší teplota měřena na parapetu laboratoře při otevřeném okně a vyšší teplota byla získána vyhřátím laboratoře sušárnou. Proto nebylo možno dosáhnout opakovaně stejných teplot.
Výsledky závislosti indukční periody na teplotě při stanovení jsou uvedeny v tabulce č. 3 a na obrázku č. 3.
Tabulka č. 3
Závislost indukční periody (P) na teplotě
|
|
Paralelní stanovení |
|
||
|
|
1 |
2 |
3 |
Æ |
|
Teplota [oC] |
10,9 |
12,4 |
13,5 |
12,27 |
|
P [min] |
14,00 |
14,90 |
15,20 |
14,70 |
|
|
||||
|
Teplota [oC] |
21,7 |
21,8 |
22,7 |
22,07 |
|
P [min] |
6,40 |
7,40 |
6,30 |
6,70 |
|
|
||||
|
Teplota [oC] |
30,0 |
30,0 |
32,0 |
30,77 |
|
P [min] |
3,80 |
3,79 |
2,41 |
3,33 |
koncentrace komponent v kyvetě:
cAA = 0,7 mg/100 ml
cHCl = 0,352 mol/l
cMO = 10 mg/l
cKBrO3 = 1,44.10–4 mol/l.
Obrázek č. 3
Závislost indukční periody (P) na teplotě
Jak je vidět z tabulky č. 3 a obrázku č. 3, velikost hodnoty indukční periody se rapidně zmenšuje s rostoucí teplotou a to od průměrné hodnoty 14,70 minut pro průměrnou teplotu 12,27 oC, přes 6,70 minut pro 22,07 oC až k průměrné hodnotě 3,33 minut pro průměrnou teplotu 30,77 oC. Změna teploty o 1 oC způsobuje změnu indukční periody asi o 0,6 minuty.
To je přesvědčivým důkazem toho, že při vyšších teplotách dochází k rychlejší oxidaci askorbové kyseliny. Proto byla všechna následující měření prováděna při stejné laboratorní teplotě 25 oC.
Z toho důvodu je třeba např. nápoje obsahující vitamin C přechovávat v chladnu (v chladničce) a pokud možno i bez přístupu vzduchu (zavřená zábrusová baňka, přelepený zábrus). Také odebírání a přípravu vzorku i analýzu samotnou je třeba provádět pokud možno rychle.
3. Závislost indukční periody na koncentraci HCl
Výsledky závislosti indukční periody na koncentraci HCl jsou uvedeny v tabulce č. 4 a na obrázku č. 4.
Tabulka č. 4
Závislost indukční periody (P) na koncentraci HCl
|
|
Indukční perioda (P) [min] |
|||
|
cHCl [mol/l] |
Paralelní stanovení |
|
||
|
|
1 |
2 |
3 |
Æ |
|
0,256 |
6,00 |
6,38 |
6,35 |
6,24 |
|
0,288 |
6,20 |
6,39 |
6,10 |
6,23 |
|
0,320 |
3,95 |
4,09 |
4,20 |
4,08 |
|
0,352 |
3,10 |
2,60 |
2,96 |
2,89 |
|
0,448 |
2,35 |
2,60 |
2,97 |
2,64 |
|
0,512 |
1,39 |
1,40 |
1,41 |
1,40 |
|
0,544 |
0,50 |
0,70 |
0,79 |
0,66 |
koncentrace ostatních komponent v kyvetě:
cAA = 0,7 mg/100 ml
cMO = 10 mg/l
cKBrO3 = 1,44.10–4 mol/l.
Jak je vidět z tabulky č. 4 a obrázku č. 4, velikost hodnoty indukční periody se značně snižuje s rostoucí koncentrací HCl. Pro koncentraci HCl menší než 0,288 mol/l se velikost hodnoty indukční periody prakticky nemění.
Obrázek č. 4
Závislost indukční periody (P) na koncentraci HCl
4. Závislost indukční periody na koncentraci methyloranže
Výsledky závislosti indukční periody na koncentraci methyloranže jsou uvedeny v tabulce č. 5 a na obrázku č. 5.
Tabulka č. 5
Závislost indukční periody (P) na koncentraci methyloranže (MO)
|
|
Indukční perioda (P) [min] |
|||
|
cMO [mg/l] |
Paralelní stanovení |
|
||
|
|
1 |
2 |
3 |
Æ |
|
4 |
10,50 |
9,40 |
9,25 |
9,72 |
|
6 |
7,50 |
8,50 |
8,50 |
8,17 |
|
8 |
5,70 |
5,70 |
4,90 |
5,43 |
|
10 |
5,80 |
6,00 |
6,80 |
6,20 |
|
12 |
11,80 |
11,00 |
11,60 |
11,47 |
|
14 |
> 30 |
> 30 |
> 30 |
> 30 |
koncentrace ostatních komponent v kyvetě:
cAA = 0,7 mg/100 ml
cHCl = 0,352 mol/l
cKBrO3 = 1,44.10–4 mol/l.
Obrázek č. 5
Závislost indukční periody (P) na koncentraci methyloranže
Jak je vidět z tabulky č. 5 a obrázku č. 5, velikost hodnoty indukční periody se s rostoucí koncentrací methyloranže nejprve snižuje a od koncentrace cMO > 8 mg/l hodnota indukční periody roste. Pro koncentrace cMO > 14 mg/l velikost hodnoty indukční periody je větší než 30 minut a nebyla dále měřena.
5. Závislost indukční periody na koncentraci KBrO3
Výsledky závislosti indukční periody na koncentraci KBrO3 jsou uvedeny v tabulce č. 6 a na obrázku č. 6.
Tabulka č. 6
Závislost indukční periody (P) na koncentraci KBrO3
|
cKBrO3 |
Indukční perioda (P) [min] |
|||
|
[mol/l] |
Paralelní stanovení |
|
||
|
|
1 |
2 |
3 |
Æ |
|
5,76.10–5 |
> 30 |
> 30 |
> 30 |
> 30 |
|
1,44.10–4 |
7,10 |
7,00 |
6,75 |
6,95 |
|
2,88.10–4 |
2,42 |
2,62 |
2,48 |
2,51 |
|
5,76.10–4 |
1,00 |
1,00 |
0,99 |
1,00 |
|
1,44.10–3 |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
koncentrace ostatních komponent v kyvetě:
cAA = 0,7 mg/100 ml
cHCl = 0,352 mol/l
cMO = 10 mg/l.
Obrázek č. 6
Závislost indukční periody (P) na koncentraci KBrO3
Jak je vidět z tabulky č. 6 a obrázku č. 6, velikost hodnoty indukční periody se snižuje s koncentrací KBrO3. Pro koncentraci KBrO3 menší než 5.10–5 mol/l velikost hodnoty indukční periody je větší než 30 minut a nebyla dále měřena.